关于组织样本以及细胞提取液样本添加蛋白酶抑制剂的问题
1. ELISA实验中为什么在制备组织匀浆和细胞提取液时建议使用蛋白酶抑制剂?
在制备组织匀浆或细胞提取液时,组织或细胞内源性蛋白酶(如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等)会被释放,可能导致以下问题:
① 靶蛋白降解: 目的蛋白会被内源性蛋白酶降解,导致假阴性结果。
② 蛋白片段干扰: 目的蛋白降解后产生的短肽可能会非特异性结合ELISA抗体,导致背景OD值升高。
如果不使用蛋白酶抑制剂,可能会导致:
① 假阴性结果: 降解导致靶蛋白的量减少,无法正确检测;
② 数据波动大、重复性差:样本中的蛋白降解程度不同,导致数据不一致;
③ 背景OD值