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做ELISA检测时，你是否遇到过标准曲线线性差、样品OD值超出检测范围、重复性差等问题？其实很多时候，问题根源在于跳过了关键的预实验步骤。今天就带大家了解如何有效的进行预实验，让后续检测少走弯路!

 

为什么要做预实验？

预实验不是“额外负担”，而是ELISA检测的“指南针”，核心价值有三点：

一是确定样品中目标物质的大致浓度范围，避免正式实验因测值过高或过低导致结果失真。有老师使用人白介素IL-6试剂盒测定细胞上清中IL-6浓度(如下图)。实验结果标曲线性良好， R2>0.99，但根据标准曲线，样本OD值均高出标曲最高浓度OD值(2.386)，导致样本浓度无法算出。

二是检验试剂盒与样本的适配性及样品干扰因素，减少样本、试剂浪费和时间成本。如部分样品可能存在溶血、杂质污染、交叉反应等干扰因素，这些问题在预实验中可提前排查。若跳过预实验，正式实验中出现异常结果(如标准曲线线性差、OD值波动大)时，无法快速判断是靶标浓度问题、试剂盒性能问题还是样品本身问题，甚至可能因无法定位问题而导致实验停滞。

三是通过挑选少量的、有代表性的样本来进行小规模的测试，提高实验的可行性、有效性和准确性。

 

预实验如何进行?

瑞迪生物提供的ELISA试剂盒预包被板板条均是可拆卸的，用多少取多少，其余的可装进铝箔袋中放-20℃保存，这也为预实验提供了很好的前提条件。通常情况下，在进行ELISA检测之前会大家会查阅大量文献来获得目标物质的大致浓度范围，但如果由于细胞上清，组织匀浆，脑脊液，肺泡灌洗液等复杂样本类型，其样本来源、培养条件、取样、保存等与文献中不一致时，就会导致样本中靶标浓度有非常大的差异，此时文献数据并不具有参考意义，那预实验就显得极为重要了。

在ELISA检测中，预实验的核心目标是确定样本的最佳稀释倍数及适配实验体系，其设计同时包含标准曲线(标曲)与待测样本，以保障后续正式实验的准确性与可靠性。

为一次性高效筛选出最优稀释倍数，建议采用拉大样本稀释梯度，例如设置10倍、100倍、1000倍等梯度。若稀释梯度过小(如2倍、5倍)，易导致各梯度样本的OD值差异无统计学意义，无法精准界定适配的稀释范围，进而影响实验进度。

若实验设计包含多分组(如空白对照组、模型组、给药处理组等)，需分别选取各分组的代表性样本进行预实验。这是由于不同处理组间的靶标蛋白浓度可能存在显著差异，单一分组样本的预实验结果无法覆盖整体实验需求。

以小鼠炎症模型研究为例，白细胞介素-6(IL-6)作为核心炎症因子，其浓度在空白对照组中理论上处于最低水平，而在模型组中呈显著高表达状态。通过同时纳入这类浓度极值分组的样本进行预实验，可快速锁定适配全部分组的稀释范围，有效提升预实验效率，为正式实验方案的优化提供科学依据。

 

预实验结果如何分析?

根据标准品浓度与OD值的对应关系，制作标准曲线并筛选出样品OD值落在标准曲线范围内的稀释比例，此比例即为正式实验的合适稀释倍数。如下图，预实验中对某血清样本进行了50倍和1000倍稀释，与标准品同时进行预实验并测得OD值。结果显示：原液的OD值大于标曲最大值，稀释1000倍时OD值接近背景，而稀释50倍时，样本OD值落在标曲范围内，因此稀释50倍即为正式实验的合适稀释度。

预实验虽简单，却能直接决定ELISA检测的成败。掌握以上方法，就能高效完成预实验，让后续正式实验一次达标。如果在预实验或检测过程中遇到问题，欢迎随时联系我们，专业技术团队随时在线为你答疑解惑!